簡(jiǎn)介

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin），又稱鬼筆鵝膏素，是從毒蘑菇鬼筆鵝膏菌(Amanita phalloides)中分離到的一種雙環(huán)肽，可以極高的親和力和特異性與肌動(dòng)蛋白絲F-actin結(jié)合，不會(huì)結(jié)合單體肌動(dòng)蛋白（G-actin）。鬼筆環(huán)肽對(duì)大小纖維的親和力相近，在許多不同的動(dòng)植物物種的肌肉和非肌肉細(xì)胞中，基本都按照一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的化學(xué)計(jì)量比結(jié)合。不像肌動(dòng)蛋白抗體，對(duì)不同物種或來(lái)源的機(jī)動(dòng)蛋白親和力會(huì)發(fā)生明顯變化。鬼筆環(huán)肽的非特異性結(jié)合幾乎可以忽略，染色和未染色的區(qū)域的差異非常明顯。鬼筆環(huán)肽及其衍生物在納摩爾濃度即可對(duì)F-actin染色，可以非常方便的標(biāo)記、識(shí)別和定量研究F-actin的分布。

使用方法：

工作液配置：原液用PBS稀釋200-500倍使用，現(xiàn)配現(xiàn)用，避光。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃避光保存；有效期12個(gè)月。

操作步驟

1. 培養(yǎng)好的細(xì)胞爬片，PBS洗滌后4%PFA固定30min。

2. 破膜液覆蓋細(xì)胞，室溫透化細(xì)胞10 min，PBS緩沖液清洗細(xì)胞3次5min。

3. 用組化筆畫圈取100 μL鬼筆環(huán)肽染色工作液完全覆蓋細(xì)胞，37℃避光孵育30 min，PBS緩沖液清洗細(xì)胞3次5 min。

4. DAPI染核10min。

5. 抗熒光猝滅劑封片。

6. 熒光顯微鏡拍照或掃描成像(選擇FITC（Ex/Em=492/518 nm）和DAPI（Ex/Em=364/454 nm）通道)。

注意事項(xiàng)

1. 建議染色后盡快完成檢測(cè)及觀察拍照。

2. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。