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細胞發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現180-200bp的DNA ladder?;蚪MDNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色/紅色熒光探針熒光素(FITC/cy3)標記的dUTP,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測。同理tunel也可行DAB顯色,明場觀察。
實驗步驟:
1.石蠟切片脫蠟入水
2.蛋白酶K修復
3.孵育Tunel工作液
4.DAPI染核
5.抗熒光猝滅封片劑封片,鏡檢
結果:
DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm,發(fā)藍光
FITC紫外激發(fā)波長465-495nm, 發(fā)射波長515-555nm,發(fā)綠光
CY3紫外激發(fā)波長510-560, 發(fā)射波長590nm,發(fā)紅光.
CY5紫外激發(fā)波長 608-648nm, 發(fā)射波長672-712,發(fā)橙光
細胞發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現180-200bp的DNA ladder?;蚪MDNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色/紅色熒光探針熒光素(FITC/cy3)標記的dUTP,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測。同理tunel也可行DAB顯色,明場觀察。
實驗步驟:
1.石蠟切片脫蠟入水
2.蛋白酶K修復
3.孵育Tunel工作液
4.DAPI染核
5.抗熒光猝滅封片劑封片,鏡檢
結果:
DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm,發(fā)藍光
FITC紫外激發(fā)波長465-495nm, 發(fā)射波長515-555nm,發(fā)綠光
CY3紫外激發(fā)波長510-560, 發(fā)射波長590nm,發(fā)紅光.
CY5紫外激發(fā)波長 608-648nm, 發(fā)射波長672-712,發(fā)橙光